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纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法,能得到比较纯的病毒。其过程如下:
1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置- 20 ℃冰箱中,备用。
2、先以5000g离心15分钟后,获取上清夜,然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。
3、接着10万g超速离心2h,将沉淀用少量STE溶解。
4、先在超速离心管中加入5-8mL的第3步所获取的含病毒样品的溶解液,然后在离心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的时候是用长针头从底部往上加的。11万g离心2.5h,发现在30 %与45 % 以及45 % 与60 %之间都有一条明亮的带,用长针头将两条不同部位的带都吸取出来,分别收集到不同的瓶内。
5、去蔗糖;用STE缓冲液适量稀释纯化的病毒,然后11万g离心3h,用少量STE(根据沉淀的量决定加入多少)缓冲液把沉淀悬起,即最后获得了纯化的病毒。-20度冻纯备用,用时可用分光光度计测定其病毒含量。

共 7 个关于本帖的回复 最后回复于 2018-4-4 22:15

xqdqs19750318 生物秀版主 发表于 2009-8-11 11:23:21 | 显示全部楼层

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我觉得纯化病毒应该考虑用层析的方法,梯度离心分辨率不够高,并且设备要求太高;还有就是放大比较困难。而柱层析分辨率和放大都比较好。
yqz118 生物秀才 发表于 2009-10-6 17:48:50 | 显示全部楼层

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参数应该具体情况具体分析吧!
cowily 生物秀才 发表于 2009-10-12 10:18:15 | 显示全部楼层
我套作流感病毒的纯化,请版主多多指教。应该用什么样的柱子做?
那个厂家的好一些?
sf25501 生物秀才 发表于 2009-11-17 21:32:43 | 显示全部楼层
谢谢了啊
schumacher01 生物秀才 发表于 2010-3-9 17:02:01 | 显示全部楼层
我觉得层析是大势所趋
uixiang 生物秀才 发表于 2012-3-15 10:08:02 | 显示全部楼层
层析?怎么操作?
skyspace2018 生物秀才 发表于 2018-4-4 22:15:56 | 显示全部楼层
离心纯化纯度高
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