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如何提高qPCR反应的灵敏度和特异性?

dealer 于 2019-8-16 14:05 发表在 [分享] [复制链接]

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1. 首先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。
2. RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。
3. 为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。
4. 使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。
5. 若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。
6. 设计引物时,避免在引物3’端含有互补序列,避免形成内部发卡结构。
7. 可使用engreen的qpcr试剂,选用化学修饰的热启动酶,扩增效率和灵敏度更高。

共 0 个关于本帖的回复 最后回复于 2019-8-16 14:05

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