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细胞转染效率低的原因及解决方案

dealer 于 2018-4-16 09:20 发表在 [分享] [复制链接]

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       细胞转染是细胞生物学分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱,望实验人员能够注意。
1.准备不足
做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。
2.细胞污染
细胞污染也是造成细胞死亡,转染效率低下的一大原因。首先,转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到绝对无菌。分享一个小秘诀:将提完质粒后或者提的最后一步,用75%乙醇沉淀,这样就除菌了。
3.质粒质量问题
转染用的质粒首先要保证数量,一般为2μg以上。质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质,也会影响转染效率。这个时候,就应该对质粒进行纯化和浓缩。
4.细胞状态不好
细胞状态不好,会导致转染效率低下。一般进行转染的细胞应该处于对数生长期。如果是贴壁细胞的话,贴壁率应该在70-80%;如果是悬浮细胞的话,应该是6×105个/孔(24孔板),一般是转染前一天换液,转染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。
5.转染试剂问题
脂质体试剂毒性较大,易造成细胞死亡和转染效率底下。可选择非脂质体转染试剂,如Entranster试剂。

点评

宁泽明 海!外直播 t.cn/RxmJTRo 禁闻视频 t.cn/RJvO789 禁止言论自由只有三个解释:1.它过去做了坏事,怕人们提起.2.它正在干坏事,怕人们批评.3.它准备继续干坏事,怕人们揭露.总之,禁止言论自由一定与坏事相关,绝对不是好   发表于 2018-4-17 15:18

共 0 个关于本帖的回复 最后回复于 2018-4-16 09:20

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