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成功进行细胞电转染实验的秘诀

dealer 于 2018-3-20 15:26 发表在 [分享] [复制链接]

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1.   电场强度要合适

合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。

2.   细胞状态要好

用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定期的细胞差,电转后,细胞膜的恢复能力强,而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源DNA.

3.   质粒质量要好

应选择纯度高的质粒,首先DNA/RNA应该超纯(A260/A280>1.8),其次应不含内毒 素,同时质粒应溶于双蒸水而不是TE缓冲溶液。另外,DNA浓度不宜过高。

4.   选择合适的电转染试剂

电击会对细胞造成一定程度的伤害,在转染试剂的选择上要注意,应选择具有细胞膜修复成分的电转染试剂,如engreen的Entranster-E,可将电击对细胞的损伤降到最低。并且,Entranster-E可适用于lonza、Bio-rad、BTX等多种电转仪。

点评

宁泽明 海!外直播 t.cn/RxBC0c2 禁闻视频 t.cn/RJvO789 小人都想扮成君子,可见君子是受人尊重的;荡妇也想装成淑女,可见淑女是受人喜爱的;现在连朝鲜都想炫耀自己民主,可见...  发表于 2018-3-22 13:53

共 0 个关于本帖的回复 最后回复于 2018-3-20 15:26

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