快捷导航
1 299

细胞转染效率低下的几个陷阱

dealer 于 2018-2-5 16:58 发表在 [分享] [复制链接]

生物秀人才网[Job.bbioo.com]

打造生物医药领域人才求职与企业招聘的专业平台
[人才首页] [招聘信息] [人才库]

欢迎加入最专业的生命科学交流社区,结交业内好友,体验更多功能。

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?注册会员

x
细胞转染是细胞生物学分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱,望实验人员能够注意。
1.准备不足
做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。
2.细胞污染
细胞污染也是造成细胞死亡,转染效率低下的一大原因。首先,转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到绝对无菌。分享一个小秘诀:将提完质粒后或者提的最后一步,用75%乙醇沉淀,这样就除菌了。
3.质粒质量问题
转染用的质粒首先要保证数量,一般为2μg以上。质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质,也会影响转染效率。这个时候,就应该对质粒进行纯化和浓缩。
4.细胞状态不好
细胞状态不好,会导致转染效率低下。一般进行转染的细胞应该处于对数生长期。如果是贴壁细胞的话,贴壁率应该在70-80%;如果是悬浮细胞的话,应该是6×105个/孔(24孔板),一般是转染前一天换液,转染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。
5.转染试剂问题
脂质体试剂毒性较大,易造成细胞死亡和转染效率底下。可选择非脂质体转染试剂,如Entranster试剂。

共 1 个关于本帖的回复 最后回复于 2018-2-6 17:11

wx_蔚兰_lIWLv 生物秀才 发表于 2018-2-6 17:11:59 | 显示全部楼层

生物秀人才网[Job.bbioo.com]

打造生物医药领域人才求职与企业招聘的专业平台
[人才首页] [招聘信息] [人才库]

感谢分享,有机会的话可以借鉴下!
举报 使用道具
您需要登录后才可以回帖 登录 | 注册会员

本版积分规则

精彩推荐

  • 实时荧光定量PCR出现很多乱峰,求大神们帮
  • 电泳单引物跑出来为什么是这个样子电泳单引
  • 晒动图——活体细胞4D成像新手段,细胞筛选
  • 美开发细菌制造生物燃料技术
  • 你还在搬砖吗

明星用户

QQ|关注生物秀|小黑屋|手机版|Archiver|生物秀 ( 沪ICP备12005474号-6 )

GMT+8, 2018-5-27 21:53 , Processed in 0.102415 second(s), 25 queries , Gzip On.