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电转染实验注意事项

dealer 于 2017-12-27 16:29 发表在 [分享] [复制链接]

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1.      选择合适的电场强度
合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。
2. 细胞的选择
用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定期的细胞差,电转后,细胞膜的恢复能力强,而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源DNA.
3. 质粒的质量
应选择纯度高的质粒,首先DNA/RNA应该超纯(A260/A280>1.8),其次应不含内毒 素,同时质粒应溶于双蒸水而不是TE缓冲溶液。另外,DNA浓度不宜过高。
4.  选择合适的电转染试剂
电击会对细胞造成一定程度的伤害,在转染试剂的选择上要注意,应选择具有细胞膜修复成分的电转染试剂,如engreen的Entranster-E,可将电击对细胞的损伤降到最低。并且,Entranster-E可适用于lonza、Bio-rad、BTX等多种电转仪。


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