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细胞增殖检测技术已广泛应用于分子生物学遗传学、肿瘤生物学、免疫学、药理和药代动力学等研究领域。细胞增殖是指细胞在周期调控因子的作用下,通过DNA复制、RNA转录和蛋白质合成等复杂反应而进行的分裂系列过程。细胞通过分裂的方式增殖,细胞增殖是生物体的重要生命特征 。单细胞生物以细胞分裂的方式产生新个体,多细胞生物以细胞分裂的方式产生新的细胞,从而补充体内衰老和死亡的细胞。细胞增殖的同时,在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,活细胞在总细胞中所占的百分比叫做细胞活力。
检测细胞存活与增殖的方法主要包括观察DNA合成含量和检测细胞代谢活性两种,前者主要是DNA前体物质(胸腺嘧啶核苷类似物)掺入法,比如BRDU、EDU法;后者主要为MTT、XTT、MTS、CCK-8、WST-1及WST-8法等,在后者中现在最主流的就是CTG(CELL TITER-GLO)发光法,此法可快速灵敏的检测活细胞数量,市场上常用的是Promega公司CellTiter-Glo化学发光细胞活性检测试剂盒。

ATP腺嘌呤核苷三磷酸(简称三磷酸腺苷)参与生物体内多种酶促反应,是活细胞新陈代谢的一个指标,其含量直接反应了细胞的数量及细胞状态:实验过程中向细胞培养基加入等体积CellTiter-Glo™试剂,测量发光值,在光信号和体系中,发光值与ATP量成正比,而ATP又和活细胞数正相关,因此可通过检测ATP含量得细胞活力。同普通的MTT、CCK8法相比,CellTiter-Glo™发光活细胞检测系统的检测试剂具有最高灵敏度和较长的信号持续时间,此系统已经广泛地应用在生命科学研究领域中,如一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等,各实验室已普遍使用此技术。此法还有很多优点,如细胞活性分析是高效的“加样-混合-测量”系统,实验操作方便快捷,同时节约细胞用量。CellTiter-Glo™试剂和细胞培养中的常用培养基兼容,如RPMI1640、MEM、DMEMand Ham's F12,也不受酚红和有机溶剂的影响,误差小,准确率高。同MTT、CCK8法具体对比可见下表:


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点评

宁泽明 海!外直播 t.cn/RxmJTRo 禁闻视频 t.cn/RxrADky 在我短短的一生里,百年一遇的洪水见过10次,500年一遇的海啸见过2次,千年一遇的地震见过2次,唯独五年一遇的全民大选一次还没遇见过。  发表于 2017-11-26 07:24

共 0 个关于本帖的回复 最后回复于 2017-11-24 10:49

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