快捷导航
0 239

细胞培养支原体污染检测及处理

钰森生物 于 2017-10-11 09:58 发表在 [分享] [复制链接]

生物秀人才网[Job.bbioo.com]

打造生物医药领域人才求职与企业招聘的专业平台
[人才首页] [招聘信息] [人才库]

欢迎加入最专业的生命科学交流社区,结交业内好友,体验更多功能。

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?注册会员

x
支原体污染及检测:  
(1)支原体污染在细胞培养中最常见、不易被查觉,但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小微生物,它无细胞壁,形态呈高度多形性,最小直径0.2um,可通过滤器。  
目前通过对国内100余株/系细胞的检测,形势不容乐观。污染率达30% ~ 60% 。课题组从国外引进细胞株/系也经常出现支原体的污染。支原体在污染细胞后,它通过影响细胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培养基中的氨基酸来抑制细胞的生长,并能降低细胞的融合率。因此,在运用各种细胞系进行实验研究时,首先要证明所用细胞有无支原体的污染。  
(2)支原体污染后,培养基可不发生浑浊,细胞病变轻微或不明显,因此难以发现。目前,支原体检测的方法有以下几种。  
(a)相差显微镜观察;
(b)低张处理地衣红染色法;  
(c)荧光染色法;
(d)酶标法;  
(e)pcr法:使用该方法进行检测。  优点:灵敏度高,检测耗时短,样品量小  (只需50ul细胞培养用液上清);
缺点:引物及制剂费用较高。

处理:
支原体污染显微镜无法观察,依经验表现为细胞生长缓慢,有细胞漂浮等等,应通过PCR 等方法鉴定,如发现支原体污染,应按规定弃用,实验室要及时全面消毒灭菌,防止蔓延。(有些常规性细胞学实验不受支原体污染影响,可以继续使用细胞传代,为防污染扩大蔓延,可以选择性的在培养基中加入高效价的其它种抗生素,并在隔离实验室操作和独立使用一切用具与培养基等)。
(普通微生物污染:培养基浑浊,高倍镜观察有微生物污染;按规定弃用并全面严格灭菌。)

共 0 个关于本帖的回复 最后回复于 2017-10-11 09:58

您需要登录后才可以回帖 登录 | 注册会员

本版积分规则

精彩推荐

  • 美开发细菌制造生物燃料技术
  • 电泳单引物跑出来为什么是这个样子电泳单引
  • 实时荧光定量PCR出现很多乱峰,求大神们帮
  • 晒动图——活体细胞4D成像新手段,细胞筛选
  • 科研人员提出纳米催化医学肿瘤治疗新策略

明星用户

QQ|关注生物秀|小黑屋|手机版|Archiver|生物秀 ( 沪ICP备12005474号-6 )

GMT+8, 2017-10-24 01:06 , Processed in 0.080806 second(s), 13 queries , Gzip On, Memcache On.