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本帖最后由 wx_娜_K75LF 于 2017-7-19 20:54 编辑

pPIC9K空载和重组载体双酶切EcoR I/ Not I后都出现了4000bp左右的带,求解?而且线性化是也有此带,想请问这是为什么?继续往下做的话会影响后期的电转酵母和表达蛋白么?详情见附图!
图片1.png

共 6 个关于本帖的回复 最后回复于 2017-7-27 12:00

abigen 生物秀才 发表于 2017-7-24 15:08:42 | 显示全部楼层

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估计是断裂的细菌基因组残留,如果它切割不了估计就是,一般不影响试验,你第一个图原始的超螺旋,前面的,都消化不了,这个你只回收你的目的带就行,不影响你蛋白表达的
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wx_娜_K75LF 生物秀才 发表于 2017-7-24 15:50:00 | 显示全部楼层

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abigen 发表于 2017-7-24 15:08
估计是断裂的细菌基因组残留,如果它切割不了估计就是,一般不影响试验,你第一个图原始的超螺旋,前面的, ...

谢谢你的解答,你的意思是说只回收我的空载体那条带再连接我的目的基因是吧!但现在问题是我没有切胶回收,只是纯化了一下就去连接我的目的基因了,构建好了提出来,结果就是第三张图,仍然存在那条4000左右的未知带,想请问你这个表达载体可以直接用么?还是我需要重新构建?再次感谢!
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abigen 生物秀才 发表于 2017-7-27 10:03:48 | 显示全部楼层
你肯定要切胶回收,不用回收4000的带,只回收目的带
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abigen 生物秀才 发表于 2017-7-27 10:04:13 | 显示全部楼层
表达载体可以用,
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abigen 生物秀才 发表于 2017-7-27 10:05:24 | 显示全部楼层
直接可以电转 转酵母菌
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wx_娜_K75LF 生物秀才 发表于 2017-7-27 12:00:17 来自手机 | 显示全部楼层
abigen 发表于 2017-7-27 10:05
直接可以电转 转酵母菌

好的,谢谢
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