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蛋白纯化标签如何选择

珞珞 于 2017-5-4 10:18 发表在 [原创] [复制链接]

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蛋白纯化的方法很多,如层析法、电泳法、超离心法、超滤等,其中蛋白质亲和层析法通常只需要一步操作便能将目标蛋白从混合物中分离出来,且纯度很高,因而备受实验者的喜爱。在进行蛋白表达时,选择合适的标签有利于蛋白的纯化,促进蛋白的可溶性,因此了解几种常用的蛋白纯化标签很重要。
一般来说,常用的蛋白纯化标签主要有His tag、GST tag、MBP tag、NusAtag、Strep tag,那么这些蛋白纯化标签有什么不同之处呢?
His tag(组氨酸标签)融合蛋白是目前最常见的表达方式,其优点是标签小,纯化步骤简便,纯化条件温和,能纯化可溶性/包涵体蛋白,一般不会影响蛋白的功能结构,且可以产出大量的目标蛋白,但该标签不适合易氧化蛋白或膜蛋白的纯化。
21.png                            
GST tag(谷胱甘肽巯基转移酶)的洗脱条件温和,有助于保持蛋白功能活性,适合pull-down 检测,具有很好的线性动态范围,但分子量较大,可能会影响蛋白质的功能和下游实验,如果蛋白不可溶,很难用变性的方法进行纯化。
22.png

MBP tag(麦芽糖结合蛋白标签)可以减少目标蛋白的降解,增加蛋白的表达量和稳定性,提高表达产物的水溶性,但标签较大,对蛋白的结构和功能会有一定影响。
NusA tag(转录终止/抗终止蛋白标签)不具有独立的纯化标签功能,需要和其他标签(如His标签)联用,可提高蛋白质的溶解性,但由于分子量较大,对蛋白下游应用会有影响。
Strep tag(strep标签)能产出高纯度(95%)的目标蛋白,且能保持目标蛋白活性,主要是因其纯化流程温和。其次,能进行变性条件下的纯化。在用于WB/ELISA,可侦测目标蛋白。另外,还可固定目标蛋白,检测蛋白质交互作用,或更进一步用以筛选治疗用蛋白质,或是工业用酵素。但Strep tag纯化系统的价格相对His tag而言较高,所产出的目标蛋白数相对较少。

共 2 个关于本帖的回复 最后回复于 2017-8-10 17:58

冰冻西瓜 生物秀才 发表于 2017-8-8 17:45:34 | 显示全部楼层

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请教大神,杂质和标签蛋白结合要怎么处理呀?
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实验室小板凳pro 生物秀才 发表于 2017-8-10 17:58:46 | 显示全部楼层

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冰冻西瓜 发表于 2017-8-8 17:45
请教大神,杂质和标签蛋白结合要怎么处理呀?

建议你可以在超声前加入还原剂或去垢剂;增加去垢剂的浓度,(2%Triton X-100 or2% Tween 20);或者在washing buffer中增加甘油的浓度(50%)减少非特异性的相互反应。考虑增加咪唑的浓度或者改变金属离子。
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