快捷导航
0 1122

细胞转染的不同方法

dealer 于 2017-9-11 10:27 发表在 [分享] [复制链接]

生物秀人才网[Job.bbioo.com]

打造生物医药领域人才求职与企业招聘的专业平台
[人才首页] [招聘信息] [人才库]

欢迎加入最专业的生命科学交流社区,结交业内好友,体验更多功能。

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?注册会员

x
1.DEAE-葡聚糖。这是早在1965年出现的转染方法。带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体可以结合带负电的DNA分子,使得DNA复合物结合在带负电的细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克,也可能是细胞内吞作用使得DNA复合体进入细胞。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染,可重复性好,转染时要除掉血清。
2.磷酸钙共沉淀转染。最早在1973年开始采用。氯化钙+DNA+磷酸缓冲液按一定的比例混和,形成极小的磷酸钙-DNA复合物沉淀黏附在细胞膜表面,借助内吞作用进入细胞质。沉淀颗粒的大小和质量对于转染的成功至关重要。pH值、钙离子浓度、DNA浓度、沉淀反应时间、细胞孵育时间乃至各组分加入顺序和混合的方式都可能对结果产生影响,重复性不佳。此法较易得到稳定转染,但转染原代细胞比较困难。
3. 电穿孔法。通过短暂的高电场电脉冲处理细胞,沿细胞膜的电压差异会导致细胞膜的暂时穿孔。DN被认为是穿过孔扩散到细胞内的。电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要,因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。理论上说电穿孔法可用于各种细胞,且不需要另外采购特殊试剂,但需要昂贵的电转仪。此法每次转染需要更多的细胞和DNA,因为细胞的死亡率高。每种细胞电转的条件都需要进行多次优化。
4. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年,此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质体细胞毒性相对较高,对不同的细胞可能会干扰细胞的代谢。
5. 病毒介导的感染。感染需要将目的基因克隆到特定的病毒体系中,经过包装细胞的包装得到改造后的病毒,再进行感染。优点是转染效率特别高,尤其是难以转染的原代细胞、活体细胞。缺点是构建病毒周期长,环节多,易出错,费用也高。
6,非脂质体转染 。最新的纳米聚合物转染试剂,如Entranster试剂,纳米材料,细胞毒性小,转染效率高,渐渐成为各大实验室的首选转染试剂。

点评

宁泽明 海!外直播 t.cn/RxBC0cw 禁闻视频 t.cn/RJJZmvp 警察不是用来解决人民提出的问题的,警察是用来解决提出问题的人民的。警匪还有区别吗?当然有区别,匪没有人给发工资的。  发表于 2017-9-22 21:42

共 0 个关于本帖的回复 最后回复于 2017-9-11 10:27

您需要登录后才可以回帖 登录 | 注册会员

本版积分规则

精彩推荐

  • 美开发细菌制造生物燃料技术
  • 电泳单引物跑出来为什么是这个样子电泳单引
  • 实时荧光定量PCR出现很多乱峰,求大神们帮
  • 晒动图——活体细胞4D成像新手段,细胞筛选
  • 科研人员提出纳米催化医学肿瘤治疗新策略

明星用户

QQ|关注生物秀|小黑屋|手机版|Archiver|生物秀 ( 沪ICP备12005474号-6 )

GMT+8, 2017-10-24 01:06 , Processed in 0.071134 second(s), 12 queries , Gzip On, Memcache On.